Plásmido Doble Nickase (m) Vitamin D Receptor/VDR: sc-423664-NIC

Vdr codifica el receptor de la vitamina D (VDR), un receptor nuclear activado por ligando que forma heterodímeros con RXR para regular la transcripción en elementos de respuesta a la vitamina D y remodelar estados de la cromatina en diversos loci diana. En células de ratón, la señalización de VDR integra la homeostasis del calcio y el fosfato con programas celulares que controlan la diferenciación, la integridad de barrera y la modulación inmunitaria, y puede intersectar con redes transcripcionales vinculadas a Wnt/β-catenina, NF-κB y MAPK. La actividad de Vdr influye en la expresión génica de osteoblastos y osteoclastos, en las uniones estrechas epiteliales y las respuestas antimicrobianas, y en vías metabólicas sensibles a señales endocrinas. La alteración de la transcripción dependiente de Vdr se estudia ampliamente en modelos de trastornos óseos y minerales, fenotipos inflamatorios y cambios en la homeostasis epitelial o metabólica.

Vitamin D Receptor/VDR El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Vdr en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Vdr. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Vdr. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Vdr alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.