Partículas Lentivirales de Activación (m) VEGF: sc-423665-LAC

Vegfa codifica el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), un ligando secretado que coordina la proliferación, migración y supervivencia del endotelio para regular la angiogénesis del desarrollo y la patológica en tejidos de ratón. La señalización de VEGF actúa principalmente a través de VEGFR2/KDR para activar las cascadas PI3K–AKT, MAPK/ERK y PLCγ–PKC, integrándose con vías inducibles por hipoxia, como el control transcripcional dependiente de HIF-1. A través de estas redes, Vegfa influye en la permeabilidad vascular, la remodelación de la matriz extracelular y el reclutamiento de células murales de soporte durante la maduración de los vasos. La actividad desregulada del eje VEGF se ha implicado en modelos de neovascularización tumoral, revascularización impulsada por isquemia, remodelación tisular inflamatoria y procesos de neovascularización ocular, lo que convierte a Vegfa en un nodo central para estudios mecanísticos de biología vascular.

Las partículas de activación lentiviral VEGF (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Vegfa en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral VEGF (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Vegfa, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de VEGF. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Vegfa y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.