Plasmide CRISPR/Cas9 KO VDAC2 (m): sc-423662

Présentation

Vdac2 code le canal anionique voltage-dépendant 2 (VDAC2), une porine majeure de la membrane externe mitochondriale qui régule le flux de métabolites et d’ions entre le cytosol et les mitochondries. VDAC2 participe à la respiration mitochondriale, à l’homéostasie redox et à la signalisation dépendante du Ca²⁺ en influençant l’échange ATP/ADP et le couplage avec les processus de transport de la membrane interne. Elle module également l’apoptose intrinsèque en contrôlant la perméabilisation de la membrane externe mitochondriale et les interactions avec les protéines de la famille BCL-2, reliant ainsi le métabolisme mitochondrial aux décisions de destinée cellulaire. La dérégulation des voies associées à VDAC2 a été impliquée dans des altérations de la bioénergétique et des réponses au stress pertinentes pour la neurodégénérescence, les mécanismes des maladies cardiométaboliques et les phénotypes de survie des cellules cancéreuses.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VDAC2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Vdac2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Vdac2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Vdac2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VDAC2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Vdac2 pour l'étude de la signalisation de VDAC2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Vdac2 essentiels à la fonction de VDAC2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Vdac2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VDAC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le VDAC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Vdac2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VDAC2 plasmide HDR (m) et le VDAC2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Vdac2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Vdac2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.