VAX1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423657

Übersicht

Vax1 kodiert VAX1, einen Homeobox-Transkriptionsfaktor, der für die embryonale Musterbildung von Vorderhirn und Auge erforderlich ist und insbesondere bei der Entwicklung des ventralen Telencephalons und des Augenstiels eine wichtige Rolle spielt. VAX1 steuert Genexpressionsprogramme, die die Spezifizierung neuraler Vorläuferzellen, die Axonleitung und die Mittellinienbildung koordinieren, und ist dabei in entwicklungsbiologische Signalwege wie die SHH-vermittelte Ventralisierung sowie andere Homeobox-Netzwerke eingebunden. Genetische Studien an der Maus bringen eine gestörte Vax1-Funktion mit angeborenen kraniofazialen und okulären Phänotypen in Zusammenhang, darunter Mikrophthalmie/Anophthalmie und Fehlbildungen der Hypothalamus-Hypophysen-Region. Diese Eigenschaften machen VAX1 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um die transkriptionelle Kontrolle neuroentwicklungsbezogener Entwicklungsverläufe und Zelllinienentscheidungen zu untersuchen.

Das VAX1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Vax1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Vax1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Vax1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VAX1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Vax1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VAX1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Vax1-Exone abzielen, die für die VAX1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Vax1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VAX1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom VAX1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Vax1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VAX1 HDR-Plasmid (m) und VAX1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Vax1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Vax1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.