VASP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423654

Descripción general

Vasp codifica la fosfoproteína estimulada por vasodilatadores (VASP), una proteína reguladora de actina de la familia Ena/VASP que coordina la elongación de los filamentos de actina, la dinámica de las adhesiones focales y la protrusión de la membrana durante la migración celular. VASP integra señales aguas abajo de quinasas dependientes de cAMP/cGMP y de GTPasas de la familia Rho para acoplar el estado de fosforilación con la remodelación del citoesqueleto y la mecanotransducción. En células de ratón, VASP contribuye a funciones plaquetarias y endoteliales, al crecimiento de neuritas y a la motilidad de células inmunitarias mediante la regulación de la adhesión, las propiedades de barrera y el movimiento dirigido. La desregulación de la dinámica de actina dependiente de VASP se ha implicado en modelos de disfunción vascular, fenotipos relacionados con trombosis y cambios en el comportamiento invasivo relevantes para la inflamación y la biología del cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VASP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Vasp en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Vasp junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Vasp tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VASP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Vasp para la investigación de la señalización de VASP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Vasp críticos para la función de VASP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Vasp para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VASP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido VASP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Vasp. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VASP (m) y el plásmido HDR VASP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Vasp para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Vasp definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.