VAP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401777-ACT

AOC3 codifica a proteína de adesão vascular-1 (VAP-1), uma glicoproteína de superfície de células endoteliais e de músculo liso que atua tanto como molécula de adesão quanto como uma amina oxidase dependente de cobre (SSAO). Ao catalisar a desaminação oxidativa de aminas primárias, a VAP-1 gera aldeídos, peróxido de hidrogênio e amônia, conectando o tráfego de leucócitos à sinalização redox e às respostas inflamatórias vasculares. A VAP-1 contribui para o rolamento, a adesão e a transmigração de leucócitos e se integra a vias que regulam a ativação endotelial, a remodelação da matriz extracelular e o estresse oxidativo. A atividade desregulada de AOC3/VAP-1 tem sido associada a estados inflamatórios crônicos e à patologia vascular, sustentando seu uso como um nó mecanístico em modelos de pesquisa voltados para imunometabolismo e inflamação.

VAP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AOC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

VAP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AOC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AOC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de VAP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AOC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de VAP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via VAP-1 em células tumorais com expressão de AOC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.