V-ATPase G1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-406125-LAC

ATP6V1G1 kodiert die G1‑Untereinheit der V1‑Domäne der vakuolären H+-ATPase (V‑ATPase), einer aus mehreren Untereinheiten bestehenden Protonenpumpe, die die ATP‑abhängige Ansäuerung von Endosomen, Lysosomen und sekretorischen Vesikeln antreibt. Durch die Regulation des luminalen pH-Werts unterstützt die V‑ATPase‑Aktivität die rezeptorvermittelte Endozytose, den vesikulären Transport, den autophagischen Fluss sowie die Aktivierung lysosomaler Enzyme und trägt zur zellulären pH‑Homöostase bei. Störungen der Untereinheitenzusammensetzung oder der Aktivität der V‑ATPase werden mit verändertem Nährstoff‑Sensing und mTOR‑assoziierter Signalübertragung, defektem Proteinumsatz und Stressantworten in Verbindung gebracht. Fehlregulierte Ansäuerung von Organellen und endolysosomale Funktionen sind wiederkehrende Merkmale in der Krebszellbiologie und in der Neurodegenerationsforschung, wodurch ATP6V1G1 ein nützliches Ziel für mechanistische Untersuchungen der Vesikelbiologie darstellt.

V-ATPase G1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ATP6V1G1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

V-ATPase G1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ATP6V1G1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen V-ATPase G1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ATP6V1G1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.