Plásmido Doble Nickase (h) V-ATPase D2: sc-404907-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)V-ATPase D2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa V-ATPase D2 (h) y el plásmido de doble nickasa V-ATPase D2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ATP6V0D2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: V-ATPase D2 Anticuerpo (7A4): sc-517031
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) V-ATPase D2 | sc-404907-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) V-ATPase D2 | sc-404907-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V0D2 codifica la subunidad D2 de la H\+-ATPasa vacuolar (V-ATPasa), una bomba de protones multisubunidad que acidifica endosomas, lisosomas y otros compartimentos intracelulares. La acidificación de orgánulos impulsada por la V-ATPasa sostiene la proteólisis lisosomal, el tráfico endocítico, la autofagia y la maduración de receptores y enzimas dependiente del pH, integrándose con vías que regulan el metabolismo y la señalización celular. En células del linaje mieloide, ATP6V0D2 se asocia con la función de los osteoclastos y la resorción ósea gracias a su contribución al transporte de protones necesario para la degradación de la matriz. La actividad desregulada de la V-ATPasa y la alteración de la homeostasis del pH vesicular se estudian en el contexto de trastornos del remodelado óseo y de procesos inflamatorios y neurodegenerativos más amplios vinculados a una función lisosomal deficiente.
V-ATPase D2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP6V0D2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP6V0D2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP6V0D2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP6V0D2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.