V-ATPase D1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419255
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- V-ATPase D1 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im V-ATPase D1-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: V-ATPase D1: sc-393322
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
V-ATPase D1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-419255 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Atp6v0d1 kodiert die D1‑Untereinheit der vakuolären H\+-ATPase (V‑ATPase) der V0‑Domäne, einer Protonenpumpe, die die Ansäuerung von Endosomen, Lysosomen und anderen intrazellulären Kompartimenten in Mauszellen antreibt. Die V‑ATPase‑abhängige pH‑Regulation unterstützt die rezeptorvermittelte Endozytose, den autophagischen Flux, die lysosomale Proteolyse und den Membrantransport; außerdem trägt sie zur Organellenhomöostase bei, die mit der Nährstoffsensorik von mTORC1 gekoppelt ist. Störungen von V‑ATPase‑Komponenten werden breit mit Defekten in der vesikulären Sortierung, einer verminderten Abbaukapazität und veränderten Signaloutputs in Verbindung gebracht, die Neurodegeneration, die Funktion von Immunzellen und die metabolische Anpassung bei Krebs beeinflussen können. Atp6v0d1 ist daher ein nützlicher Knotenpunkt, um zu untersuchen, wie Organellenansäuerung mit Proteostase und Stressantwort‑Signalwegen zusammenwirkt.
Das V-ATPase D1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Atp6v0d1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Atp6v0d1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Atp6v0d1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die V-ATPase D1-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Atp6v0d1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der V-ATPase D1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Atp6v0d1-Exone abzielen, die für die V-ATPase D1-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Atp6v0d1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom V-ATPase D1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom V-ATPase D1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Atp6v0d1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das V-ATPase D1 HDR-Plasmid (m) und V-ATPase D1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Atp6v0d1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Atp6v0d1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.