Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) V-ATPase B2: sc-401896-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)V-ATPase B2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa V-ATPase B2 (h) y el plásmido de doble nickasa V-ATPase B2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ATP6V1B2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: V-ATPase B2 Anticuerpo (D-11): sc-166045
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) V-ATPase B2 | sc-401896-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) V-ATPase B2 | sc-401896-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V1B2 codifica la subunidad B2 de la H⁺-ATPasa vacuolar (V-ATPasa), una bomba de protones multisubunidad que acopla la hidrólisis de ATP a la acidificación de orgánulos. La actividad de la V-ATPasa es esencial para la maduración de endosomas y lisosomas, la endocitosis mediada por receptores, el flujo de autofagia-lisosoma y la clasificación de proteínas en las vías secretora y endolisosomal. Al regular el pH luminal, la V-ATPasa también influye en la detección de nutrientes y la señalización lisosomal vinculada a mTORC1, así como en el tráfico de membranas y el procesamiento de antígenos. La desregulación de la función de la V-ATPasa y de la homeostasis del pH endolisosomal se ha implicado ampliamente en la neurobiología y en las respuestas celulares al estrés, lo que respalda a ATP6V1B2 como una diana para estudios mecanísticos de procesos dependientes de la acidificación.
V-ATPase B2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP6V1B2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP6V1B2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP6V1B2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP6V1B2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.