utrophin Lentiviral Activation Particles (h): sc-400522-LAC

Das menschliche UTRN-Gen kodiert Utrophin, einen dystrophinassoziierten zytoskelettalen Adapter, der F‑Aktin mit dem Dystroglykan‑Komplex am Sarkolemm verbindet und so zur Organisation der Membranstabilität und der Signaltransduktion beiträgt. Utrophin ist an der Assemblierung und Aufrechterhaltung des Dystrophin‑Glykoprotein‑Komplexes beteiligt und vermittelt Schnittstellen zu Interaktionen mit der extrazellulären Matrix, die die Mechanotransduktion und die Zellpolarität beeinflussen. Seine Expression ist entwicklungsabhängig reguliert und kann als Reaktion auf Muskelverletzung und -remodelling moduliert werden, was es für Studien zur Integrität von Muskelfasern und zur Organisation der neuromuskulären Endplatte relevant macht. Veränderte Utrophin-Spiegel und seine subzelluläre Lokalisation werden häufig im Kontext von Dystrophinopathien und verwandten Modellen der Muskeldegeneration untersucht, da es als funktionelles Paralog innerhalb desselben strukturellen Signalwegs wirkt.

utrophin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente UTRN-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

utrophin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der UTRN-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen utrophin-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen UTRN-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.