Plasmide CRISPR/Cas9 KO USP9X (h): sc-402285

Présentation

USP9X code une protéase spécifique de l’ubiquitine qui régule la stabilité des protéines en retirant des chaînes d’ubiquitine de substrats clés, modulant ainsi la protéostasie et l’amplitude des signaux. Elle a été associée au contrôle de la survie cellulaire et des réponses au stress via la modulation de voies telles que la signalisation NF-κB, les réseaux de réponse aux dommages de l’ADN et les processus liés au trafic membranaire. En influençant le renouvellement de protéines régulatrices et de composants du système ubiquitine–protéasome, USP9X affecte la progression du cycle cellulaire, l’apoptose et les programmes de différenciation. Une activité ou une expression dérégulée de USP9X a été associée à une altération de l’homéostasie de signalisation dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, notamment en oncologie et dans des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO USP9X (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène USP9X dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du USP9X, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert USP9X à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine USP9X.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en USP9X pour l'étude de la signalisation de USP9X, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de USP9X essentiels à la fonction de USP9X
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de USP9X pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le USP9X plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le USP9X plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus USP9X. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le USP9X plasmide HDR (h) et le USP9X (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie USP9X pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles USP9X définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.