Particules Lentivirales d'Activation (h) USP47: sc-403157-LAC

USP47 (ubiquitin specific peptidase 47) est une enzyme humaine de désubiquitination qui retire l’ubiquitine de substrats protéiques afin de moduler leur stabilité, leur localisation et leurs sorties de signalisation. En « éditant » le renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine, USP47 contribue à la protéostasie et influence des voies liées à la signalisation des dommages à l’ADN, au contrôle du cycle cellulaire et aux réponses au stress, via la régulation des dynamiques d’ubiquitination. Des réseaux de désubiquitination altérés impliquant USP47 ont été associés à des dérégulations de la croissance et des programmes de maintien du génome observées dans divers contextes pathologiques, ce qui étaye l’intérêt de l’étudier comme nœud des circuits liés au système ubiquitine–protéasome et à la réparation. Les études fonctionnelles évaluent fréquemment comment la désubiquitination dépendante d’USP47 remodèle les programmes transcriptionnels et l’activité des voies de signalisation en conditions basales ou après une agression génotoxique.

Les particules d'activation lentivirales USP47 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de USP47 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales USP47 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription USP47, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de USP47. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif USP47 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.