USP45 Lentiviral Activation Particles (m2): sc-429548-LAC-2

Das Mausgen Usp45 kodiert das deubiquitinierende Enzym USP45, eine ubiquitinspezifische Protease, die den Proteinumsatz reguliert, indem sie Ubiquitinketten entfernt und dadurch die Stabilität und Aktivität wichtiger nukleärer Substrate moduliert. USP45 wurde mit der Aufrechterhaltung des Genoms in Verbindung gebracht, unter anderem durch Funktionen in der DNA-Reparatur und in Reaktionen auf replikationsassoziierten Stress, und ist damit an Signalwegen beteiligt, die die Chromatinintegrität bewahren und das Fortschreiten des Zellzyklus koordinieren. Eine fehlregulierte Deubiquitinierung und eine beeinträchtigte Verarbeitung von DNA-Schäden infolge von Störungen der USP45-Funktion sind für Studien zu Phänotypen genomischer Instabilität und krebsassoziierten Mechanismen relevant. Forschungswerkzeuge zu Usp45/USP45 unterstützen Untersuchungen zur Ubiquitin-Signalgebung, zur Kartierung von Netzwerken der DNA-Schadensantwort und zur funktionellen Genomik in Maus-Zell- und In-vivo-Modellen.

USP45 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Usp45-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

USP45 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Usp45-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen USP45-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Usp45-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.