Partículas Lentivirales de Activación (m) USP34: sc-421760-LAC

Usp34 codifica la enzima desubiquitinante USP34, una proteasa específica de ubiquitina que edita cadenas de poliubiquitina para controlar la estabilidad de las proteínas y la amplitud de la señalización. USP34 se ha vinculado con la regulación de vías clave, incluida la señalización Wnt/β-catenina, y otros procesos dependientes de ubiquitina que influyen en programas transcripcionales, la progresión del ciclo celular y las respuestas al estrés celular. Debido a sus efectos sobre la proteostasis y la transducción de señales, se estudian las alteraciones en la actividad de USP34 en el contexto de fenotipos del desarrollo y de la desregulación, asociada a enfermedad, de vías de crecimiento y diferenciación. La USP34 de ratón ofrece un sistema genéticamente manejable para investigar mecanismos conservados de desubiquitinación en la fisiología normal y en estados celulares relevantes para la enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral USP34 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Usp34 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral USP34 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Usp34, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de USP34. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Usp34 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.