Particules Lentivirales d'Activation (h) USP34: sc-409215-LAC

L’USP34 humain code une protéase spécifique de l’ubiquitine qui retire des chaînes d’ubiquitine des protéines substrats afin de moduler leur stabilité, leur localisation et leur signalisation. USP34 a été impliquée dans la régulation de la dynamique de la voie Wnt/β-caténine via la désubiquitination de composants de cette voie, influençant ainsi des programmes transcriptionnels qui gouvernent la prolifération, la différenciation et des états cellulaires de type « stem ». Elle participe également à la protéostasie cellulaire et aux processus de réponse au stress en ajustant la dégradation dépendante de l’ubiquitine et les interactions entre voies de signalisation. Une activité ou une expression dérégulée d’USP34 a été associée à des altérations de la signalisation oncogénique et à des phénotypes liés au maintien du génome, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie du cancer et dans des troubles apparentés pilotés par la signalisation.

Les particules d'activation lentivirales USP34 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de USP34 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales USP34 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription USP34, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de USP34. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif USP34 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.