USP25 Lentiviral Activation Particles (m): sc-424423-LAC

Mouse Usp25 kodiert USP25, ein deubiquitinierendes Enzym, das Ubiquitinketten von Substratproteinen entfernt und so deren Stabilität, ihren Transport sowie die Signaltransduktion reguliert. USP25 ist an der ubiquitinabhängigen Kontrolle entzündlicher und angeborener Immunwege beteiligt, einschließlich der Modulation von NF-κB- und interferonassoziierten Signal-Knotenpunkten, und trägt zur Proteostase bei, indem es den Umsatz von Effektoren dieser Signalwege mitbestimmt. Eine veränderte USP25-Aktivität wurde in der Literatur mit fehlregulierten Immunantworten und neuroinflammatorischen Prozessen in Verbindung gebracht, was für Mechanismen relevant ist, die in der Infektionsbiologie, bei Neurodegeneration und in tumorassoziierten Signalzusammenhängen untersucht werden. Diese Eigenschaften machen Usp25 zu einem nützlichen Genlokus, um Ubiquitin-Editing in Stressantworten, Zytokinsignalisierung und der Regulation von Zellzuständen in Mausmodellsystemen zu analysieren.

USP25 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Usp25-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

USP25 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Usp25-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen USP25-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Usp25-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.