Plásmido Doble Nickase (h) USP25: sc-406674-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)USP25 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa USP25 (h) y el plásmido de doble nickasa USP25 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a USP25. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: USP25 Anticuerpo (C-5): sc-398414
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) USP25 | sc-406674-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) USP25 | sc-406674-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano USP25 codifica una proteasa específica de ubiquitina que elimina cadenas de ubiquitina de proteínas sustrato, moldeando así la estabilidad proteica y la amplitud de la señalización dentro del sistema ubiquitina–proteasoma. USP25 se ha relacionado con la regulación de la señalización inmunitaria innata e inflamatoria, incluida la modulación de NF-κB y de vías asociadas al interferón, y puede influir en la transducción de señales proximal al receptor mediante la desubiquitinación de adaptadores clave. Al controlar el recambio y el tráfico dependientes de ubiquitina, USP25 contribuye a la proteostasis y a las respuestas al estrés que afectan la proliferación celular y las decisiones de supervivencia. La desubiquitinación desregulada en la que participa USP25 se ha implicado en contextos relevantes para la biología tumoral y la neuroinflamación, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la señalización mediada por ubiquitina.
USP25 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus USP25 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de USP25. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de USP25. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con USP25 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.