Usherin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423630

概要

Ush2a は、感覚上皮の一次繊毛周囲膜複合体（periciliary membrane complex）に豊富に局在する、大型の細胞外マトリックス関連膜貫通タンパク質であるアッシェリン（usherin）をコードしており、機械感覚構造の支持と、細胞の長期的な健全性維持に寄与します。マウスでは、アッシェリンは細胞接着、繊毛輸送、細胞骨格との連結に関わるタンパク質複合体を協調させることで、ステレオシリアの組織化や視細胞の維持に貢献します。USH2A の破綻はアッシャー症候群II型および網膜色素変性症と強く関連しており、この遺伝子が繊毛依存的シグナル伝達と感覚ニューロンの恒常性を制御する経路に関与することを示しています。そのため、Ush2a の機能喪失モデルは、網膜および内耳の文脈における繊毛輸送、細胞外足場（スキャフォールド）の構築、ならびに変性に関連するストレス応答を解析するために用いられます。

Usherin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUsh2a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ush2a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ush2aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Usherinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Usherinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ush2a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Usherinの機能に不可欠なUsh2aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ush2aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Usherin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUsherin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ush2a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Usherin HDRプラスミド（m）および Usherin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUsh2aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUsh2a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。