Plasmide CRISPR/Cas9 KO USF-2 (h): sc-401713

Présentation

USF2 code le facteur de stimulation amont 2 (USF‑2), un facteur de transcription bHLH à fermeture éclair leucine, ubiquitaire, qui se fixe aux motifs E‑box et module l’expression génique basale ainsi que celle induite par des stimuli. USF‑2 participe au contrôle transcriptionnel de l’homéostasie métabolique, de la progression du cycle cellulaire, de la différenciation et des réponses au stress, via une régulation coordonnée de l’architecture des promoteurs et du contexte chromatiniens. Son activité recoupe des voies impliquées dans le métabolisme du glucose et des lipides, la signalisation inflammatoire et le stress oxydant, et elle peut influencer des programmes transcriptionnels liés à la biologie tumorale. Des altérations de l’expression ou de la fonction d’USF2 ont été associées à une prolifération déréglée et à des phénotypes métaboliques, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques du remodelage des réseaux transcriptionnels.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO USF-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène USF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du USF2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert USF2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine USF-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en USF2 pour l'étude de la signalisation de USF-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de USF2 essentiels à la fonction de USF-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de USF2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le USF-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le USF-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus USF2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le USF-2 plasmide HDR (h) et le USF-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie USF2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles USF2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.