UPII Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423621

Descripción general

Upk2 codifica la uroplaquina II (UPII), un marcador de diferenciación asociado a tetraspaninas de las células “paraguas” del urotelio que contribuye al ensamblaje de la placa urotelial apical y al mantenimiento de la barrera orina–sangre. La UPII participa en el tráfico de membrana y en la formación de complejos de uroplaquinas que organizan microdominios lipídicos especializados, lo que sustenta la polaridad epitelial y la función de barrera. La alteración de la composición de las uroplaquinas o de los programas de diferenciación en el urotelio se ha relacionado con la disrupción de la integridad de la barrera, la inflamación y una mayor susceptibilidad a lesiones del tracto urinario. En modelos murinos, la expresión de Upk2 se utiliza habitualmente para estudiar la identidad de linaje urotelial y la remodelación epitelial en la fisiopatología vesical.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UPII (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Upk2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Upk2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Upk2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UPII.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Upk2 para la investigación de la señalización de UPII, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Upk2 críticos para la función de UPII
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Upk2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UPII CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido UPII CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Upk2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UPII (m) y el plásmido HDR UPII (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Upk2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Upk2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.