Plasmide CRISPR/Cas9 KO UNCX (m): sc-423613

Présentation

Uncx code le facteur de transcription à homéoboîte UNCX, un régulateur nucléaire se liant à l’ADN impliqué dans l’organisation embryonnaire et la spécification du destin cellulaire chez la souris. L’activité d’UNCX contribue à des réseaux de régulation génique du développement qui coordonnent la différenciation neuronale et l’organisation des tissus dérivés des somites, en s’intégrant à des programmes transcriptionnels contrôlant l’identité régionale et la maturation. Des altérations de la fonction d’Uncx ont été associées à des défauts du développement axial/somitique et à des processus neurodéveloppementaux, ce qui en fait un nœud d’intérêt pour l’étude de phénotypes congénitaux et de l’engagement de lignée. Dans les systèmes expérimentaux, UNCX sert de marqueur et de modulateur d’états de différenciation lorsque un contrôle transcriptionnel précis est requis.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UNCX (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Uncx dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Uncx, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Uncx à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UNCX.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Uncx pour l'étude de la signalisation de UNCX, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Uncx essentiels à la fonction de UNCX
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Uncx pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UNCX plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le UNCX plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Uncx. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UNCX plasmide HDR (m) et le UNCX (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Uncx pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Uncx définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.