Plasmide CRISPR d'Activation (h) UNC5H3: sc-403782-ACT

UNC5C code pour le récepteur humain de la nétrine UNC5H3, un récepteur de dépendance qui transmet des signaux de guidage chimiorépulsifs et contribue au guidage axonal, à la migration neuronale et à l’organisation des synapses. Via la liaison à la nétrine‑1 et la signalisation en aval, UNC5H3 influence la dynamique du cytosquelette, l’adhésion et la sensibilité à l’apoptose, en intégrant des entrées issues de voies qui façonnent l’architecture tissulaire et la formation des circuits neuronaux. Des altérations de l’activité et de l’expression d’UNC5C ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux ainsi qu’à des programmes de motilité cellulaire dérégulés impliqués dans la biologie du cancer et dans des contextes de maladies neurodégénératives. En tant que récepteur de guidage de surface cellulaire, UNC5H3 est également pertinent pour l’étude du trafic des récepteurs, de la signalisation dépendante du ligand et de signaux de survie spécifiques au contexte.

UNC5H3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UNC5C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UNC5H3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UNC5C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UNC5C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UNC5H3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UNC5C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UNC5H3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UNC5H3 dans les cellules tumorales présentant une expression de UNC5C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.