Plasmide CRISPR/Cas9 KO UMPS (m): sc-423609

Présentation

Umps code l’uridine monophosphate synthétase (UMPS), une enzyme bifonctionnelle qui catalyse les étapes terminales de la biosynthèse de novo des pyrimidines, en convertissant l’orotate en UMP grâce à ses activités d’orotate phosphoribosyltransférase et de décarboxylase de l’orotidine-5′-phosphate. UMPS contribue au maintien de l’homéostasie des pools de nucléotides, nécessaire à la réplication de l’ADN, à la synthèse de l’ARN et à la progression du cycle cellulaire, reliant ainsi le métabolisme des pyrimidines à la capacité proliférative et à la stabilité du génome. Une perturbation de la fonction d’UMPS affecte indirectement les réseaux métaboliques du métabolisme à un carbone et couplés aux folates, via une modification de la demande en nucléotides, et peut remodeler les réponses cellulaires au stress de réplication. La dérégulation des voies de synthèse des pyrimidines est largement pertinente pour l’étude des mécanismes des maladies métaboliques et des phénotypes prolifératifs dans les systèmes mammifères, y compris les modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UMPS (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Umps dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Umps, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Umps à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UMPS.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Umps pour l'étude de la signalisation de UMPS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Umps essentiels à la fonction de UMPS
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Umps pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UMPS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le UMPS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Umps. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UMPS plasmide HDR (m) et le UMPS (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Umps pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Umps définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.