Plasmide CRISPR d'Activation (h) UHRF1: sc-403851-ACT

UHRF1 (ubiquitin-like with domaines PHD et RING finger 1) est un régulateur épigénétique qui coordonne le maintien de la méthylation de l’ADN avec les modifications de la chromatine pendant la phase S. En reconnaissant l’ADN hémiméthylé et des marques histoniques spécifiques, UHRF1 recrute DNMT1 et des facteurs associés afin de préserver des programmes de silençage transcriptionnel qui influencent la progression du cycle cellulaire, la stabilité du génome et les réponses aux dommages de l’ADN. Une expression dérégulée d’UHRF1 est associée à des profils de méthylation aberrants et à des programmes de prolifération altérés observés dans divers contextes de biologie des cancers. En tant que protéine « hub » de la chromatine, UHRF1 est fréquemment étudiée pour son rôle dans l’hérédité épigénétique, l’assemblage de la chromatine couplé à la réplication et les réseaux de répression transcriptionnelle.

UHRF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UHRF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UHRF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UHRF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UHRF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UHRF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UHRF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UHRF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UHRF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de UHRF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.