Plásmido Doble Nickase (h) UDP-GlcDH: sc-405002-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)UDP-GlcDH consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa UDP-GlcDH (h) y el plásmido de doble nickasa UDP-GlcDH (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a UGDH. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: UDP-GlcDH Anticuerpo (B-4): sc-137058
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) UDP-GlcDH | sc-405002-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) UDP-GlcDH | sc-405002-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El UGDH humano codifica la UDP-glucosa 6-deshidrogenasa (UDP-GlcDH), una enzima citosólica que oxida la UDP-glucosa a ácido UDP-glucurónico, un precursor central para la biosíntesis de glicosaminoglicanos y proteoglicanos. Al controlar la disponibilidad de ácido UDP-glucurónico, la UDP-GlcDH ayuda a regular la composición de la matriz extracelular, la arquitectura del glucocálix y las interacciones célula–célula/célula–matriz que influyen en la adhesión, la migración y la mecanotransducción. La actividad de UGDH se integra con el metabolismo de carbohidratos y las vías de interconversión de azúcares nucleotídicos que sustentan los programas de glicosilación durante el desarrollo y la remodelación tisular. La expresión desregulada de UGDH o el flujo a través del ácido UDP-glucurónico puede alterar la producción de hialuronano y de GAG sulfatados, vinculando este eje con la fibrosis, la señalización inflamatoria y la reprogramación de la matriz asociada al cáncer en sistemas experimentales.
UDP-GlcDH El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus UGDH en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de UGDH. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de UGDH. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con UGDH alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.