Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ubr4 (m): sc-427303

Présentation

Ubr4 code une ligase E3 de l’ubiquitine de la famille des N‑recognines, qui contribue au contrôle qualité des protéines en reconnaissant des résidus N‑terminaux déstabilisants et en favorisant leur élimination dépendante de l’ubiquitine. Dans les cellules de souris, UBR4 participe à la protéostasie, à la régulation de la stabilité des complexes protéiques et à la coordination des voies de dégradation induites par le stress, la reliant plus largement au système ubiquitine–protéasome et à la biologie de la voie « N‑end rule ». Des fonctions rapportées relient également UBR4 au trafic membranaire et à l’homéostasie neuronale, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de mécanismes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs où la signalisation par l’ubiquitine et le maintien du protéome sont perturbés. Comme l’ubiquitination intervient dans le contrôle du cycle cellulaire, la signalisation et l’organisation du cytosquelette, la perturbation d’Ubr4 est utile pour disséquer la manière dont les ligases de l’ubiquitine ajustent ces processus en conditions normales et pathologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ubr4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ubr4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ubr4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ubr4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ubr4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ubr4 pour l'étude de la signalisation de Ubr4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ubr4 essentiels à la fonction de Ubr4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ubr4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ubr4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Ubr4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ubr4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ubr4 plasmide HDR (m) et le Ubr4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ubr4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ubr4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.