Plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE2E3 (m): sc-423576

Présentation

Ube2e3 code l’enzyme de conjugaison de l’ubiquitine murine UBE2E3, un composant E2 du système ubiquitine–protéasome qui transfère l’ubiquitine des enzymes E1 vers les ligases E3 afin de réguler le renouvellement des protéines et la signalisation. Par l’ubiquitination, UBE2E3 contribue à la protéostasie, aux réponses au stress et au contrôle des voies associées au cycle cellulaire et aux dommages de l’ADN, en modulant la stabilité des substrats et les programmes transcriptionnels en aval. En tant que modulateur du contrôle qualité des protéines et de la signalisation régulatrice par l’ubiquitine, une activité altérée d’UBE2E3 peut influencer l’homéostasie cellulaire dans des contextes pertinents pour la neurobiologie, l’inflammation et des phénotypes associés au cancer. L’étude des réseaux d’ubiquitination dépendants d’UBE2E3 aide à préciser comment les enzymes E2 ajustent la dynamique des voies et la spécificité des substrats selon les tissus.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE2E3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ube2e3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ube2e3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ube2e3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UBE2E3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ube2e3 pour l'étude de la signalisation de UBE2E3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ube2e3 essentiels à la fonction de UBE2E3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ube2e3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UBE2E3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le UBE2E3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ube2e3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UBE2E3 plasmide HDR (m) et le UBE2E3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ube2e3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ube2e3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.