Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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UBC9 Double Nickase Plasmid (h): sc-400859-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das UBC9 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- UBC9 Double-Nickase-Plasmid (h) und UBC9 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf UBE2I abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: UBC9: sc-271057
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
UBC9 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400859-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UBC9 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400859-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UBE2I kodiert UBC9, das einzige E2-SUMO-konjugierende Enzym, das SUMO auf Zielproteine überträgt und so Protein-stabilität, subzelluläre Lokalisation und makromolekulare Interaktionen reguliert. Über die SUMOylierung beeinflusst UBC9 die Signalweiterleitung und Reparatur bei DNA-Schäden, den Zellzyklusverlauf, die Chromatinorganisation, Transkriptionsprogramme sowie den nukleozytoplasmatischen Transport und verknüpft dabei stressresponsive Signalwege mit der Proteostase. Störungen der UBC9-abhängigen SUMOylierung wurden mit einer fehlregulierten Genomstabilität und veränderter Transkriptionskontrolle in Verbindung gebracht; zudem wird eine aberrante Aktivität des SUMO-Signalwegs häufig in der Krebsbiologie und bei zellulären Stressphänotypen im Zusammenhang mit Neurodegeneration beobachtet. Als zentraler Knotenpunkt in der SUMO-Kaskade dient UBC9 als hilfreicher Ausgangspunkt, um SUMO-abhängige Regulation wichtiger Substrate und das Crosstalk zwischen Signalwegen zu untersuchen.
UBC9 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des UBE2I-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von UBE2I abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die UBE2I-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit UBE2I-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.