Plasmide CRISPR/Cas9 KO Tyrosine Hydroxylase (h): sc-400273

Présentation

TH code la tyrosine hydroxylase, l’enzyme limitante de la biosynthèse des catécholamines, qui catalyse la conversion de la L-tyrosine en L-DOPA, précurseur de la dopamine, de la noradrénaline et de l’adrénaline. Son activité intègre la disponibilité du cofacteur tétrahydrobioptérine (BH4), une catalyse dépendante du fer et une régulation par phosphorylation afin de contrôler la production de neurotransmetteurs dans les neurones dopaminergiques et noradrénergiques ainsi que dans les cellules chromaffines de la médullosurrénale. La tyrosine hydroxylase est au cœur de la différenciation neuronale, du chargement vésiculaire des neurotransmetteurs, de la signalisation synaptique et des réponses au stress cellulaire liées à l’équilibre rédox et à la fonction mitochondriale. La dérégulation de l’expression ou de l’activité de TH est largement étudiée dans le contexte d’un déficit en dopamine, d’altérations de la signalisation catécholaminergique et de dysfonctionnements des circuits associés à la neurodégénérescence.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Tyrosine Hydroxylase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TH, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TH à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Tyrosine Hydroxylase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TH pour l'étude de la signalisation de Tyrosine Hydroxylase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TH essentiels à la fonction de Tyrosine Hydroxylase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TH pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Tyrosine Hydroxylase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Tyrosine Hydroxylase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TH. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Tyrosine Hydroxylase plasmide HDR (h) et le Tyrosine Hydroxylase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TH pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TH définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.