TWIK-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407263

Visão geral

KCNK6 codifica o TWIK-2 (K2P6.1), um canal de potássio de dois poros (K2P) que contribui para a condutância de K+ de fundo (corrente de fuga) e ajuda a estabelecer o potencial de membrana em repouso e a excitabilidade da membrana. A atividade do TWIK-2 influencia a homeostase iônica e a sinalização dependente de cálcio ao moldar a polarização celular, com funções descritas na atividade do músculo liso vascular, na biologia endotelial e na ativação de células imunes. Por meio do seu impacto sobre as propriedades elétricas e a sinalização a jusante, o TWIK-2 tem sido estudado em vias associadas à regulação do tônus vascular e a respostas inflamatórias. Assim, a disfunção desregulada de canais K2P, incluindo o TWIK-2, é relevante para investigações mecanísticas de hipertensão, disfunção vascular e fisiopatologia mediada pelo sistema imune.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TWIK-2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene KCNK6 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do KCNK6, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do KCNK6 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TWIK-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de KCNK6 para a investigação da sinalização de TWIK-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) KCNK6 críticos para a função TWIK-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos KCNK6 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TWIK-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo TWIK-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus KCNK6. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TWIK-2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR TWIK-2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia KCNK6 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo KCNK6 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.