Plasmide CRISPR/Cas9 KO TUTase (h): sc-406803

Présentation

Le gène humain **TUT1** code la **terminal uridylyltransférase 1** (TUTase), une polymérase d’ARN non canonique qui catalyse l’uridylation en 3′ d’une grande diversité de substrats ARN. En façonnant la structure de l’extrémité 3′ des ARN, la TUTase contribue à la maturation et au renouvellement des ARN, influençant le métabolisme des snARN spliceosomiques ainsi qu’une régulation plus large de l’expression génique au niveau post‑transcriptionnel. L’uridylation dépendante de TUT1 s’interface avec des voies de contrôle qualité de l’ARN qui régissent la stabilité des petits ARN et de certaines populations d’ARNm. Une dérégulation des programmes d’ajout de queues et de dégradation des ARN impliquant TUT1 a été associée à des états d’expression génique altérés observés dans le cancer et d’autres troubles caractérisés par un traitement de l’ARN perturbé.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TUTase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TUT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TUT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TUT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TUTase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TUT1 pour l'étude de la signalisation de TUTase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TUT1 essentiels à la fonction de TUTase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TUT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TUTase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TUTase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TUT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TUTase plasmide HDR (h) et le TUTase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TUT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TUT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.