Plásmido CRISPR de Activación (h) TTP-α: sc-411045-ACT

TTPA codifica la proteína de transferencia de α‑tocoferol (TTP‑α), una proteína citosólica de unión a lípidos que transporta selectivamente el α‑tocoferol (vitamina E) para sostener la defensa antioxidante celular y la integridad de las membranas. Al regular la distribución intracelular de la vitamina E, TTP‑α influye en la homeostasis redox, la susceptibilidad a la peroxidación lipídica y la señalización sensible al estrés vinculada a la función mitocondrial y del retículo endoplásmico. La actividad alterada de TTPA se asocia con fenotipos neurodegenerativos y con una mayor vulnerabilidad tisular relacionada con el estrés oxidativo, lo que refleja la importancia del manejo del α‑tocoferol en células longevas y metabólicamente activas. Por ello, la regulación de TTPA en humanos es relevante para estudios del metabolismo lipídico, el daño oxidativo y las relaciones genotipo–fenotipo en modelos neuronales y hepáticos.

TTP-α El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TTPA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TTP-α El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TTPA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TTPA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TTP-α. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TTPA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TTP-α en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TTP-α en células tumorales con expresión de TTPA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.