TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407927-ACT

TTF1 (Transkriptions-Terminationsfaktor 1) ist ein nukleoläres DNA-bindendes Protein, das die Transkription durch RNA-Polymerase I reguliert, indem es die Termination der rRNA-Gen-Transkription fördert und die Chromatinstruktur der rDNA organisiert. Durch die Kontrolle von Termination, Replikationsgabel-Barrieren und nukleolärer Architektur trägt TTF1 zur Ribosomenbiogenese, Genomstabilität und zu zellzyklusassoziierten Wachstumsprogrammen bei. Störungen der rDNA-Transkription und nukleoläre Stressantworten, die mit TTF1-abhängigen Prozessen verknüpft sind, werden in der krebsbezogenen Biologie häufig mit dysregulierter Proliferation und veränderter Proteostase in Verbindung gebracht. TTF1 dient daher als nützlicher Knotenpunkt, um die Funktion des Nukleolus, die Regulation von rDNA-Wiederholungen und die Koordination von Transkription und Replikation in menschlichen Zellen zu untersuchen.

TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TTF1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TTF1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TTF1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TTF/Transcription Termination Factor/TTF1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TTF1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TTF/Transcription Termination Factor/TTF1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TTF/Transcription Termination Factor/TTF1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TTF1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.