Plasmide CRISPR/Cas9 KO Trypsin-4 (m): sc-423521

Présentation

La Try4 murine code la trypsine-4, une protéase à sérine sécrétée qui clive les substrats peptidiques après des résidus basiques et contribue à la protéolyse extracellulaire. En régulant le renouvellement des protéines dans l’espace péricellulaire, Try4 peut influencer la signalisation des récepteurs activés par les protéases, la maturation de peptides bioactifs et le remodelage de la matrice extracellulaire. L’activité protéolytique des membres de la famille des trypsines s’entrecroise avec les cascades inflammatoires et la dynamique de la barrière épithéliale via une action coordonnée avec d’autres protéases à sérine et des inhibiteurs endogènes. Un déséquilibre entre protéases et inhibiteurs est fréquemment étudié dans des modèles de lésion tissulaire, d’inflammation et de remodelage du microenvironnement tumoral, ce qui fait de Try4 une cible utile pour des études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Trypsin-4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Try4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Try4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Try4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Trypsin-4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Try4 pour l'étude de la signalisation de Trypsin-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Try4 essentiels à la fonction de Trypsin-4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Try4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Trypsin-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Trypsin-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Try4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Trypsin-4 plasmide HDR (m) et le Trypsin-4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Try4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Try4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.