Plasmide CRISPR/Cas9 KO Trypsin-3 (m): sc-423520

Présentation

Prss3 code la trypsine-3, une protéase à sérine sécrétée qui catalyse le clivage protéolytique après des résidus lysine ou arginine et contribue au renouvellement des protéines extracellulaires. Dans les tissus de souris, l’activité de la trypsine-3 peut influencer le remodelage péricellulaire en traitant des composants de signalisation des récepteurs activés par les protéases (PAR) et en interagissant avec des inhibiteurs endogènes tels que les inhibiteurs de protéases à sérine, modulant ainsi les réponses inflammatoires et celles liées à la fonction barrière. Une protéolyse dérégulée de la famille des trypsines a été associée à une dynamique épithéliale aberrante, à des voies liées à la pancréatite et au remodelage du microenvironnement tumoral via des modifications de l’adhésion cellulaire et du traitement de la matrice. Par conséquent, Prss3 est étudié pour ses rôles au sein de réseaux de protéases qui régulent la sécrétion, l’homéostasie tissulaire et des cascades de signalisation dépendantes des protéases.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Trypsin-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Prss3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Prss3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Prss3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Trypsin-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Prss3 pour l'étude de la signalisation de Trypsin-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Prss3 essentiels à la fonction de Trypsin-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Prss3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Trypsin-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Trypsin-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Prss3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Trypsin-3 plasmide HDR (m) et le Trypsin-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Prss3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Prss3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.