Plásmido CRISPR de Activación (h) TrxR1: sc-400994-ACT

TXNRD1 codifica la tioredoxina reductasa 1 (TrxR1), una selenoenzima citosólica que mantiene la tioredoxina en su estado reducido para sostener la homeostasis redox celular. A través del sistema de tioredoxina, TrxR1 influye en la síntesis y reparación del ADN, el equilibrio tiol–disulfuro de las proteínas y las respuestas al estrés oxidativo y electrofílico, integrándose con vías que regulan la apoptosis, la proliferación y la señalización inflamatoria. La actividad de TXNRD1 se interconecta con las redes antioxidantes dependientes de glutatión y NADPH y modula programas de transcripción sensibles al estado redox. La expresión desregulada de TXNRD1/TrxR1 y la adaptación redox se estudian con frecuencia en contextos como el metabolismo del cáncer, la neurodegeneración y la biología del estrés cardiovascular e inflamatorio.

TrxR1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TXNRD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TrxR1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TXNRD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TXNRD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TrxR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TXNRD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TrxR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TrxR1 en células tumorales con expresión de TXNRD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.