Plasmide CRISPR d'Activation (m) TRPC6: sc-423517-ACT

Trpc6 code TRPC6, un canal cationique non sélectif perméable au calcium qui agit en aval de la signalisation de la phospholipase C pour coupler la stimulation des récepteurs à l’entrée intracellulaire de Ca²⁺. Dans les cellules murines, TRPC6 participe à la régulation de l’excitabilité membranaire, au remodelage du cytosquelette et aux réponses mécanoréceptrices, en intégrant des signaux issus des récepteurs couplés aux protéines G et des récepteurs à activité tyrosine kinase. L’activité du canal influence des voies dépendantes du Ca²⁺, notamment la signalisation calcineurine/NFAT et MAPK, façonnant les programmes transcriptionnels et la contractilité cellulaire. Une dérégulation de la signalisation de TRPC6 a été associée à la biologie glomérulaire rénale et à la fonction des podocytes, ainsi qu’à des processus de remodelage vasculaire et cardiaque, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la physiopathologie induite par le calcium.

TRPC6 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Trpc6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TRPC6 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Trpc6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Trpc6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TRPC6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Trpc6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TRPC6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TRPC6 dans les cellules tumorales présentant une expression de Trpc6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.