Plasmide Double Nickase (h) TRPC1: sc-401040-NIC

TRPC1 (transient receptor potential cation channel subfamily C member 1) code un canal cationique de la membrane plasmique qui contribue à l’entrée de Ca2+ dépendante des récepteurs et des stocks, façonnant la dynamique du Ca2+ cytosolique et la signalisation en aval. L’influx de Ca2+ dépendant de TRPC1 s’intègre à la signalisation PLC/IP3, au couplage STIM/ORAI et à des voies régulées par le Ca2+ telles que MAPK et NFAT, influençant la prolifération, la migration et la différenciation cellulaires. Dans les cellules humaines, des altérations de l’activité de TRPC1 et de ses profils d’expression ont été associées à une dérégulation de l’homéostasie calcique observée lors du remodelage cardiovasculaire, de processus neuropathiques et de phénotypes de signalisation liés au cancer, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la fonction des canaux ioniques et de la transcription dépendante du calcium.

TRPC1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TRPC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TRPC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TRPC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TRPC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.