Plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin T-FS (m): sc-423462

Présentation

Tnnt3 code la troponine T du muscle squelettique à contraction rapide (Troponine T‑FS), un composant central du complexe de troponine du filament fin qui couple la liaison du Ca²⁺ cytosolique au déplacement de la tropomyosine et au cycle des ponts actine–myosine. En ancrant le complexe de troponine à la tropomyosine, la troponine T‑FS contribue à déterminer la cinétique de contraction et les performances contractiles spécifiques au type de fibre lors du couplage excitation–contraction. La régulation de Tnnt3 interfère avec la myofibrillogenèse, le maintien des sarcomères et la signalisation dépendante du calcium qui ajuste l’adaptation musculaire à l’activité et à la charge. Une dérégulation ou une utilisation modifiée des isoformes de la troponine T rapide est pertinente dans les études portant sur la faiblesse du muscle squelettique, la désorganisation myofibrillaire et les mécanismes associés des maladies neuromusculaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin T-FS (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnnt3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnnt3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnnt3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Troponin T-FS.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnnt3 pour l'étude de la signalisation de Troponin T-FS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tnnt3 essentiels à la fonction de Troponin T-FS
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnnt3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Troponin T-FS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Troponin T-FS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnnt3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Troponin T-FS plasmide HDR (m) et le Troponin T-FS (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnnt3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnnt3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.