Plasmide CRISPR d'Activation (h) Troponin C: sc-406429-ACT

TNNC1 code la troponine C cardiaque/de type squelettique lent, une protéine EF-hand liant le Ca2+ qui agit comme capteur du calcium au sein du complexe de troponine du filament fin afin de réguler l’interaction actine–myosine et la contraction du sarcomère. Lors de la fixation du Ca2+, la troponine C induit des changements conformationnels qui lèvent l’inhibition médiée par la tropomyosine, couplant le signal d’excitation–contraction à la génération de force dans le muscle strié. L’activité de TNNC1 s’articule avec l’homéostasie du calcium et les voies de l’appareil contractile qui façonnent l’assemblage des myofibrilles, l’énergétique musculaire et la mécanotransduction. Une expression ou une fonction dérégulée de TNNC1 est impliquée dans des cardiomyopathies héréditaires et des phénotypes contractiles, ce qui étaye son utilisation dans des études sur la biologie du sarcomère et les mécanismes des maladies cardiaques.

Troponin C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TNNC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Troponin C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TNNC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TNNC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Troponin C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TNNC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Troponin C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Troponin C dans les cellules tumorales présentant une expression de TNNC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.