tropomodulin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405617

Übersicht

TMOD3 kodiert Tropomodulin 3, ein Kappenprotein für das „pointed end“ von Aktinfilamenten, das die Filamentlänge und -stabilität reguliert und damit die Organisation des kortikalen Aktins, die Zellform und mechanische Eigenschaften unterstützt. Durch die Modulation der Aktindynamik trägt TMOD3 zu Prozessen des Zytoskelett-Remodelings wie Zellmigration, Adhäsion und Zytokinese bei und steht in funktioneller Wechselwirkung mit Signalwegen, die Membrantransport und Aktomyosin-Kontraktilität steuern. Eine veränderte Aktinregulation wurde in unterschiedlichen Krankheitskontexten, in denen die Zytoskelettorganisation gestört ist, in Zusammenhang gebracht, darunter Krebszellinvasion und hämatologische Zelldysfunktionen, was TMOD3 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung zytoskelettabhängiger Phänotypen macht. TMOD3 ist außerdem relevant für die Erforschung der Architektur erythroider und immunologischer Zellen, bei denen eine präzise Kontrolle der Aktinfilamente für eine normale Zellfunktion erforderlich ist.

Das tropomodulin 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TMOD3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TMOD3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TMOD3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die tropomodulin 3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TMOD3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der tropomodulin 3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TMOD3-Exone abzielen, die für die tropomodulin 3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TMOD3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom tropomodulin 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom tropomodulin 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TMOD3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das tropomodulin 3 HDR-Plasmid (h) und tropomodulin 3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TMOD3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TMOD3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.