Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIM10 (m): sc-422691

Présentation

TRIM10 de souris (Trim10) code une ligase E3 de l’ubiquitine à motif tripartite, impliquée dans le contrôle dépendant de l’ubiquitine de la stabilité des protéines et du renouvellement des complexes de signalisation. Les protéines de la famille TRIM participent fréquemment à la régulation de la signalisation de l’immunité innée, des réponses au stress et de processus liés au cytosquelette ou à la différenciation, via la modulation de l’ubiquitination et de la protéostasie. Dans les contextes hématopoïétiques, les protéines TRIM sont souvent associées aux programmes d’engagement de lignée et de maturation, ce qui fait de Trim10 une cible d’intérêt pour étudier les réseaux régulateurs associés à la lignée érythroïde et, plus largement, la biologie des cellules immunitaires. Une activité dérégulée des voies de l’ubiquitine est une caractéristique récurrente des mécanismes impliqués dans les maladies inflammatoires et hématologiques, ce qui soutient l’utilisation de perturbations de Trim10 pour explorer les dépendances de voie dans des modèles murins pertinents.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIM10 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Trim10 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Trim10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Trim10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRIM10.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Trim10 pour l'étude de la signalisation de TRIM10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Trim10 essentiels à la fonction de TRIM10
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Trim10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRIM10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TRIM10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Trim10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRIM10 plasmide HDR (m) et le TRIM10 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Trim10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Trim10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.