TRB-3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401746-ACT

TRIB3 (TRB-3) kodiert eine katalytisch inaktive Pseudokinase, die als stressresponsiver Adapter fungiert und die Signalstärke in mehreren Signalwegen reguliert. TRB-3 moduliert die AKT/PKB-Aktivität und greift in die PI3K–AKT-, MAPK- sowie ER-Stress-/UPR-Signalgebung ein, wodurch es den Glukosestoffwechsel, die Lipidhomöostase, Autophagie und Apoptose beeinflusst. Unter Nährstoffmangel und Hypoxie ist TRIB3 induzierbar und integriert Transkriptionsprogramme nachgeschaltet von ATF4/CHOP und anderen Stressregulatoren, wodurch es Entscheidungen über das Zellschicksal mitprägt. Eine dysregulierte TRIB3-Expression wurde mit Stoffwechselstörungen, Entzündung und tumorspezifischen Signalkontexten in Verbindung gebracht, was mechanistische Untersuchungen in der kardio-metabolischen Forschung und der Krebsbiologie unterstützt.

TRB-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TRIB3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TRB-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TRIB3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TRIB3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TRB-3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TRIB3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TRB-3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TRB-3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TRIB3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.