translin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423528

Übersicht

Das Mausgen **Tsn** kodiert **Translin**, ein konserviertes RNA- und DNA-bindendes Protein, das mit **Trax (TSNAX)** einen heteromeren Komplex bildet und an der posttranskriptionellen Genregulation beteiligt ist. Translin wird mit RNA-Transport und -Stabilität, der microRNA-Verarbeitung über den C3PO-Nukleasekomplex sowie der Modulation lokalisierter Translation in neuronalen und Keimzell-Kontexten in Verbindung gebracht. Über diese Aktivitäten beeinflusst TSN stressresponsive Signalwege und Genexpressionsprogramme, die Zellproliferation und Differenzierung prägen. Veränderte, TSN-assoziierte RNA-Regulationsnetzwerke wurden mit neuroverhaltensbezogenen Phänotypen und der metabolischen Regulation in Zusammenhang gebracht, was **Tsn** zu einem nützlichen Lokus macht, um RNA-vermittelte Mechanismen in krankheitsrelevanten Modellen zu untersuchen.

Das translin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tsn-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tsn-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tsn nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die translin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tsn-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der translin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tsn-Exone abzielen, die für die translin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tsn-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom translin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom translin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tsn-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das translin HDR-Plasmid (m) und translin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tsn-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tsn-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.