TR2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403818-ACT

Das humane NR2C1 kodiert TR2, einen verwaisten nukleären Rezeptor, der als sequenzspezifischer Transkriptionsfaktor fungiert und Genexpressionsprogramme reguliert, die mit Zellschicksal, Stoffwechsel und endokriner Signalgebung verknüpft sind. TR2 bindet an Response-Elemente nukleärer Rezeptoren und interagiert mit Koregulatoren, um Transkriptionsnetzwerke zu modulieren, die an Differenzierung, Reproduktionsbiologie und Entwicklungsprozessen beteiligt sind. In zellulären Signalwegen kann die TR2-Aktivität den Chromatinzustand und die transkriptionelle Homöostase beeinflussen und so Linienentscheidungen sowie stressresponsive Genexpression prägen. Eine dysregulierte NR2C1/TR2-Expression oder -Signalgebung wurde in der Literatur mit veränderten Differenzierungszuständen und krebsrelevanten Transkriptionsprogrammen in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in Studien zur Genregulation stützt.

TR2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NR2C1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TR2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NR2C1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NR2C1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TR2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NR2C1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TR2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TR2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NR2C1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.