Plasmide CRISPR d'Activation (h) TRα: sc-401475-ACT

THRA code le récepteur des hormones thyroïdiennes alpha (TRα), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui se fixe sur des éléments de réponse aux hormones thyroïdiennes afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant le métabolisme cellulaire, la prolifération, la différenciation et le développement. La signalisation de TRα s’intègre au remodelage de la chromatine dépendant de corégulateurs et interfère avec des voies régissant la fonction mitochondriale, le contrôle du cycle cellulaire et l’expression génique spécifique des tissus. Une activité dérégulée des récepteurs des hormones thyroïdiennes et une expression modifiée de THRA ont été associées à des anomalies du développement et à des phénotypes liés au système endocrinien, et les programmes transcriptionnels dépendants de TRα sont fréquemment étudiés dans des contextes tels que la biologie cardiaque, squelettique et neuronale. En tant que nœud de facteur de transcription, THRA est également utilisé pour explorer des réseaux de gènes sensibles aux hormones et des mécanismes épigénétiques de régulation de l’expression génique dans les cellules humaines.

TRα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de THRA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TRα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus THRA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription THRA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TRα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus THRA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TRα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TRα dans les cellules tumorales présentant une expression de THRA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.