Plasmide CRISPR d'Activation (h) Tomosyn: sc-403625-ACT

Le gène humain **STXBP5** code la tomosyne, une protéine se liant à la syntaxine qui régule l’assemblage du complexe SNARE et l’amorçage des vésicules afin de moduler la fusion membranaire et l’exocytose. En interagissant avec les t‑SNAREs de la membrane plasmique, la tomosyne influence la sécrétion régulée dans les contextes neuronaux et endocriniens, en façonnant la dynamique de libération des neurotransmetteurs et des hormones. La modulation du trafic vésiculaire liée à **STXBP5** a été étudiée dans des voies contrôlant la transmission synaptique, la libération des granules plaquettaires et la sécrétion d’insuline, reliant ainsi son activité à des phénotypes cardiométaboliques et neurobiologiques. Une expression ou une fonction altérée de la tomosyne peut perturber des réseaux de signalisation dépendants de la sécrétion, faisant de **STXBP5** un nœud utile pour étudier la dérégulation de la fusion vésiculaire dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

Tomosyn Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STXBP5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Tomosyn Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STXBP5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STXBP5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Tomosyn. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STXBP5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Tomosyn au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Tomosyn dans les cellules tumorales présentant une expression de STXBP5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.