TOM40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400967

Übersicht

TOMM40 kodiert TOM40, die porenbildende β-Fass-Untereinheit der Translokase des äußeren mitochondrialen Membrankomplexes (TOM), der die Erkennung und den Import nukleär kodierter mitochondrialer Proteine vermittelt. Durch die Kontrolle der Translokation von Vorläuferproteinen in die Mitochondrien unterstützt TOM40 die oxidative Phosphorylierung, die mitochondriale Proteostase und stressresponsive Qualitätskontrollwege einschließlich der Mitophagie. Eine veränderte Funktion oder Expression von TOMM40 kann die mitochondriale Bioenergetik stören und die Anreicherung fehlgeleiteter Proteine fördern, wodurch Defekte im mitochondrialen Import mit Mechanismen neurodegenerativer und metabolischer Erkrankungen verknüpft werden. Genetische Variation im TOMM40-Lokus wurde im Zusammenhang mit altersassoziierten Phänotypen und dem Risiko neurologischer Erkrankungen untersucht, was mechanistische Untersuchungen in relevanten zellulären Modellen motiviert.

Das TOM40 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TOMM40-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TOMM40-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TOMM40 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TOM40-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TOMM40-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TOM40-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TOMM40-Exone abzielen, die für die TOM40-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TOMM40-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TOM40 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TOM40 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TOMM40-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TOM40 HDR-Plasmid (h) und TOM40 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TOMM40-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TOMM40-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.