Tom1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423467

Übersicht

Tom1 (Zielgen von Myb1) kodiert ein endosomales Adapterprotein, das ubiquitinierte Fracht an die mit ESCRT assoziierte Transportmaschinerie koppelt und so zur Reifung von Endosomen und zur lysosomalen Sortierung beiträgt. Über Interaktionen mit clathrin- und ESCRT-bezogenen Komponenten hilft TOM1, den Rezeptorabbau, die Homöostase von Membranproteinen und die Abschwächung von Signalwegen nach der Endozytose zu regulieren. Diese Prozesse überschneiden sich mit der Autophagie‑Lysosomen-Funktion und der angeborenen Immun-Signalübertragung, wodurch Tom1 für die Untersuchung relevant ist, wie vesikulärer Transport Entzündungen und zelluläre Stressantworten moduliert. Fehlregulierte endosomale Sortierung und ubiquitinabhängiger Transport sind in Mausmodellen häufig mit neuroinflammatorischen und neurodegenerativen Phänotypen sowie mit einer Dysregulation des Immunsystems verknüpft.

Das Tom1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tom1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tom1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tom1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Tom1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tom1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Tom1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tom1-Exone abzielen, die für die Tom1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tom1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Tom1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Tom1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tom1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Tom1 HDR-Plasmid (m) und Tom1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tom1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tom1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.